Chuỗi bài viết về nghiên cứu Protein – Tập 3 – Kỹ thuật chuyển màng

nghiên cứu protein

Chuối bài viết về nghiên cứu Protein – Tập 3

Kỹ thuật chuyển màng

Ở bài trước các bạn đã có cái nhìn tổng quát về việc chuẩn bị protein (link xem lại tại đây: https://blog.merck-lifescience.com.vn/chuoi-bai-viet-ve-nc-protein-tap-1/) và điện di SDS-PAGE (https://blog.merck-lifescience.com.vn/chuoi-bai-viet-ve-nghien-cuu-protein-tap-2/).

Ở bài viết lần này, chúng ta hãy cùng nhau xem protein từ bản gel được chuyển lên màng cần lưu ý những gì nhé

Chuyển màng

Có 2 kiểu chuyển màng:

a. Chuyển ướt (wet transfer system): toàn bộ màng, gel trong khay chuyển được ngập trong dung dịch đệm chuyển

b. Chuyển bán khô (Semi-dry transfer system): chỉ một phần màng và gel ngập trong dung dịch đệm chuyển

Nhìn chung, phương pháp chuyển ướt là kỹ thuật phổ biến nhất do hiệu suất và tính ổn định khi chuyển protein từ gel lên màng cao hơn so với chuyển bán khô

chuyen mang

Nguyên vật liệu cần chuẩn bị:

Blotting paper

• Màng chuyển (vd. Immobilon® PVDF)

Transfer buffer

• Methanol, Ethanol hoặc Isopropanol

• Hệ thống buồng chuyển (vd, SB10 omniPAGE mini electroblotting system)

• Nguồn điện

Chuẩn bị thực hiện

1. Chuẩn bị đủ đệm chuyển màng để đổ ngập buồng chuyển, và thêm 200 mL để ổn định gel và màng, và làm ướt giấy lọc.

2. Tháo gel ra khỏi cassette; cắt bỏ phần tacking gel và các giếng.

3. Nhúng gel vào dung dịch đệm chuyển từ 10 tới 30 phút.

4. Ngâm giấy lọc trong dung dịch đệm chuyển ít nhất 30 giây.

5. Chuẩn bị màng:

Thao tác

1. Mở phần giữ cassette.
Chú ý: Để đảm bảo chuyển đều, loại bóng khí giữa các lớp bằng con lăn Blot Roller hoặc cẩn thận lăn pipette hoặc que khuấy trên bề mặt mỗi lớp khi xếp. Không tạo áp lực quá mạnh để tránh làm hỏng màng và gel

2. Đặt một miếng xốp bọt biển lên một mặt của cassette.

3. Đặt một tấm giấy lọc lên trên miếng xốp.

4. Đặt miếng gel lên trên giấy lọc.

5. Đặt màng lên trên bản gel.

6. Đặt tấm giấy lọc thứ hai lên trên.

7. Đặt miếng xốp bọt biển thứ hai lên trên giấy lọc.

8. Đóng khung giữ cassette.

Phương pháp chuyển protein (Buồng chuyển)

1. Đặt giá cassette vào buồng chuyển, để mặt có gel ở cực âm (-) và phía có màng thì ở cực dương (+).

2. Thêm đệm vào buồng chuyển ngập hết giá cassette.

3. Lắp cực màu đen (–) và cực màu đỏ (+) với giắc cắm tương ứng trong buồng chuyển

4. Cắm cực dương và cực âm tương ứng với lỗ cắm trên nguồn điện.

5. Đặt 1 cục gel lạnh trong buồng chuyển theo hướng dẫn của nhà sản xuất

6. Bật hệ thống chạy từ 1-2 tiếng ở 6 – 8 V/cm khoảng cách giữa các điện cực. Thực hiện theo đúng hướng dẫn sử dụng của nhà sản xuất.

7. Sau khi hoành thành chuyển, tháo cassette ra khỏi buồng.

8. Dùng forceps, cẩn thận tách các lớp ra khỏi khung.

Những mẹo giúp chuyển màng thành công!

Sau khi protein được chuyển từ gel lên màng, bạn có thể yên tâm chúng ta đã đi được hơn nửa đường của quy trình western blotting rồi. Ở bài viết sau, chúng ta sẽ tiến tới những công đoạn cuối cùng để phát hiện protein trên màng nhé. Hãy cùng theo dõi để cập nhật thêm các thông tin về kỹ thuật Western Blot.

Các bạn có thể tham khảo thêm sản phẩm tại đây: https://www.sigmaaldrich.com/VN/en/technical-documents/protocol/protein-biology/gel-electrophoresis/sds-page

Tải Brochure tại đây

Chúc các bạn thành công!

Công ty TNHH Merck Việt Nam

Liên hệ tư vấn:

    NHẬN TIN MỚI QUA EMAIL