nghiên cứu protein

Chuối bài viết về nghiên cứu Protein – Tập 2

Quy trình phân tách Protein trên bản Gel SDS-PAGE

Tập 1: Quy trình chuẩn bị mẫu trong kỹ thuật Western Blotting

Tập 2: Quy trình phân tách Protein trên bản Gel SDS-PAGE

Tập 3: Kỹ thuật chuyển màng

Tập 4: Phương pháp phát hiện miễn dịch

Tập 5: Western Blotting và giải pháp xử lý sự cố

Ở bài viết lần này, chúng ta hãy cùng nhau xem quy trình phân tách protein trên bản gel SDS-PAGE nhé.

Điện di SDS-PAGE:

Bản gel polyacrylamide được hình thành dựa trên sự polymer hóa phản ứng acrylamide và bis-acrylamide. Bằng cách biến tính protein và tạo cực âm đồng nhất cho chúng, chúng ta có thể phân tách protein dựa trên kích thước khi chúng di chuyển tới điện cực dương.

Vật liệu và hóa chất cần thiết: buồng điện di thẳng đứng với nguồn điện, tấm kính, đệm cao su và lược

nghiên cứu protein
nghiên cứu protein

Hóa chất thiết yếu

Công thức pha chế

Mã sản phẩm

Acrylamide/bis-acrylamide solution

Đệm đổ gel

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 (chuẩn bị gel phân tách):

Hòa tan 18.15 g Tris base trong 80 mL nước cất.

Điều chỉnh pH về 8.8 sử dụng 6N HCl.

Tinh chỉnh về thể tích cuối cùng 100 mL với nước cất

0.5 M Tris-HCl, pH 6.8 (chuẩn bị gel cô đặc):

Hòa tan 6 g Tris base trong 80 mL nước cất.

Điều chỉnh pH về 6.8 sử dụng 6N HCl.

Tinh chỉnh về thể tích cuối cùng 100 mL với nước cất

Chuẩn bị gel:

 • Làm sạch kính và đệm cao su bằng nước cất và cồn

 • Lắp kính và đệm cao su vào khung trên bề mặt phẳng chắc chắn, ổn định

 • Chuẩn bị dung dịch gel phân tách với thể tích (10 mL) phụ thuộc vào nồng độ gel yêu cầu

Gel %

Nước (mL)

30% acrylamide (mL)

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 (mL)

10% SDS (µL)

10% APS (µL)

TEMED*(µL)

8%

4.6

2.6

2.6

100

100

10

10%

3.8

3.4

2.6

100

100

10

12%

3.2

4.0

2.6

100

100

10

15%

2.2

5.0

2.6

100

100

10

Gel %

8%

10%

12%

15%

Nước (mL)

4.6

3.8

3.2

2.2

30% acrylamide (mL)

2.6

3.4

4.0

5.0

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 (mL)

2.6

2.6

2.6

2.6

1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 (mL)

2.6

2.6

2.6

2.6

10% SDS (µL)

100

100

100

100

10% APS (µL)

100

100

100

100

TEMED*(µL)

10

10

10

10

* Thành phần TEMED phải được thêm vào cuối cùng

• Đổ gel vào khung đã lắp. Để là phẳng bề mặt gel phân tách, trải một lớp nước hoặc isopropanol lên trên

• Để gel đông trong 20-30 phút ở nhiệt độ phòng

• Chuẩn bị gel cô đặc (stacking gel) với thể tích tham khảo (10mL)

* Thành phần TEMED phải được thêm vào cuối cùng

• Loại bỏ lớp nước hoặc isopropanol trên bề mặt resolving gel

• Thêm 5% dung dịch stacking gel tới khi trào. Cài lược ngay sau đó, đảm bảo không có bóng khí bị giữ trong gel hoặc gần giếng

• Để gel đông trong khoảng 20-30 phút ở nhiệt độ phòng

Sau khi gel đã cô lại là chúng ta có thể sử dụng để điện di hoặc nếu chưa dùng ngay, bản gel có thể được gói trong giấy được làm ướt bằng nước cất hoặc đệm chạy và bảo quản trong ngăn mát trong khoảng 3 ngày.

Protein sau khi được chuẩn bị xong sẽ được nạp lên các giếng.

Một lưu ý nhỏ, thông thường bước điện di sẽ được tách thành 2 khoảng chạy:

Set 1: cài đặt điện thế khoảng 80-100V, chạy trong 15 phút để các protein trong giếng dồn hết thành vạch trong lớp gel cô đặc.

Set 2: tăng điện thế lên 120V, chạy trong 1 tiếng để các protein được phân tách trong lớp gel phân tách.
Tùy thuộc vào kích thước protein mà thời gian và điện thế điện di cần được tối ưu hóa để có được kết quả phân tách tốt nhất.

Ở bài viết tiếp theo, chúng ta sẽ xem protein từ bản gel sẽ được chuyển lên màng như thế nào nhé. Hãy cùng theo dõi để cập nhật thêm các thông tin về kỹ thuật Western Blot.

Các bạn có thể tham khảo thêm sản phẩm tại đây.

Tải về tài liệu chi tiết tại đây.

XEM THÊM

PHARMA DAY – Ngày hội ngành Dược lĩnh vực phân tích & QC

nhằm cập nhật, chia sẻ những thông tin mới nhất về giải pháp toàn diện cho phòng phân tích QC Dược hiện đại, Merck Việt Nam đã long trọng tổ chức sự kiện PHARMA Day với chủ đề “Xu hướng và giải pháp toàn diện cho phòng phân tích QC Dược hiện đại” vào ngày 14/09/2022 tại khách sạn Park Royal, TP.Hồ Chí Minh.

Read More »

    TƯ VẤN
    SẢN
    PHẨM TỪ MERCK